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101.
抗猪流行性腹泻病毒单克隆抗体的研制及其特性鉴定 总被引:1,自引:1,他引:0
以新生乳猪增殖猪流行性腹泻病毒(PEDV),通过蔗糖密度梯度离心将其纯化,获得较为完整的病毒颗粒。病毒ELISA效价为1∶3×105,蛋白含量为3.96g/L。将提纯的PEDV免疫BALB/c小鼠,取免疫鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,融合率为95.6%。用间接ELISA进行筛选,共检出38个阳性孔,阳性率为28.8%。对其中15个阳性值较高的孔进行3次再克隆,阳性率达100%,最后获得15株稳定分泌特异性抗PEDV单抗(McAb)的杂交瘤细胞。ELISA阻断试验与交叉试验证明,其分泌的抗体具有高度特异性。腹水和细胞培养上清的ELISA效价分别为1∶103~1∶106和1∶128~1∶512。经鉴定,15株McAb的分子类型均为IgG,均无免疫沉淀特性。杂交瘤细胞的染色体数目为90~110,平均95。尤为重要的是,这些杂交瘤细胞所分泌的抗体,有的对PEDV具有中和作用,能够阻断病毒对猪只的侵害作用。 相似文献
102.
马杜霉素和泰妙菌素联合应用对雏鸡新城疫抗体水平的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
试验将不同剂量的马杜霉素和泰妙菌素分别添加到雏鸡的饲料和饮水中同时使用,通过检测不同组别雏鸡血清中ND血凝抑制效价,探讨马杜霉素和泰妙菌素不同剂量联合应用时对雏鸡免疫功能的影响。试验结果表明:正常推荐剂量的马杜霉素5mg/kg与泰妙菌素10mg/kg联合使用时,一般不会对机体免疫造成明显伤害;应用马杜霉素10mg/kg拌料能明显造成机体免疫系统伤害,当其与正常或加倍剂量的泰妙菌素联合应用更会加重对机体免疫功能的不良影响,致使抗体水平下降。 相似文献
103.
间接ELISA法对禽霍乱抗体的动态监测 总被引:5,自引:0,他引:5
将40只50日龄健康禽霍乱非免疫鸡随机分为四组,每组10只。用禽霍乱蜂胶佐剂灭活疫苗对各组鸡进行不同水平的免疫,同时设非免疫对照组。各组鸡间隔5-7天采血,以间接ELISA法测定血清P/N值,并确定临界值。将P/N值在2.1-4.7的13只试验鸡以一个最小致死量(相当于10个菌/ml)进行攻毒试验,同时设攻毒对照,在1周内3只对照鸡均表现感染发病并死亡,而试验鸡均健活,从而初步证明所确定的临界值是合理的。 相似文献
104.
Costa JZ Adams A Bron JE Thompson KD Starkey WG Richards RH 《Journal of fish diseases》2007,30(7):419-426
The pepscan procedure was used to identify betanodavirus B-cell epitopes recognized by neutralizing mouse monoclonal antibodies (MAbs) and serum samples obtained from sea bass, Dicentrarchus labrax, naturally infected with betanodavirus. Pepscan was performed with a panel of thirty-four 12-mer synthetic peptides that mimicked the entire betanodavirus capsid protein. Sea bass serum samples reacted strongly with three regions of the capsid protein comprising amino acid residues 1-32, 91-162 and 181-212. The latter region was also recognized by neutralizing MAbs and coincided with a region of high antigenic propensity identified by an antigen prediction algorithm. These data suggest that a region of the betanodavirus capsid protein spanning amino acid residues 181-212 may represent a neutralization domain that could potentially be used to inform the development of nodavirus vaccines and immunodiagnostic reagents. 相似文献
105.
106.
应用B-淋巴细胞杂交瘤技术,建立了5株稳定分泌抗空肠弯曲菌共同抗原(CA)单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株(4A7,9D6、9C2、11A1、11D4)。在5株杂交瘤分泌的McAb中,有4株(4A7、9D6、11A1、11D4)针对CA中的耐热抗原成分,对其中4A7、9D6两株分泌的McAb进行免疫印迹分析表明,其与CA中大约为7.7×104u的蛋白移行带出现特异反应;一株(9C2)针对CA中的不耐热抗原成分。对杂交瘤细胞的核型分析表明,其染色体数在93-108之间。体外传代4个月,仍保持稳定分泌抗体的特性。这种McAb具有较强的特异性,除与幽门弯曲菌出现弱阳性反应外,与参试的其它31种非弯曲菌属的细菌均为阴性反应。对不同地区、不同来源的516株空肠弯曲菌的鉴定表明,制备的McAb与现有空肠弯曲菌均出现阳性反应,与常规鉴定法的符合率为100%。 相似文献
107.
分别以猪源CD2配体协同新城疫(ND)Ⅳ疫苗免疫18日龄鸡和绵羊源CD2配体协同法氏囊(IBD)中等毒力疫苗免疫25日龄鸡,采用β-微量法和琼脂扩散法测ND抗体及IBD抗体水平。结果表明,两种CD2配体均能促进鸡体内特异性抗体的提前产生,并且试验组鸡抗体效价显著高于对照。 相似文献
108.
MxIrt1是从苹果属植物小金海棠中克隆出的二价阳离子转运膜蛋白基因。为进一步研究该基
因的功能, 利用MxIrt1基因位于第3和第4跨膜区之间的162 bp片段, 构建了原核表达载体pGEX-MxIrt1,经原核表达、亲和层析、获得GST2MxIRT1融合蛋白, 以融合蛋白为抗原, 制备多克隆抗体, ELISA方法检测抗体效价阳性, 蛋白质印迹检测植物体内总蛋白, 获得与预期大小一致的特异性条带。上述结果表明,表达的目的蛋白可用于免疫组织化学、蛋白质印迹检测。 相似文献
109.
110.
旨在制备抗丝状支原体丝状亚种(Mmm)的特异性单克隆抗体(MAb),为牛传染性胸膜肺炎(CBPP)病原诊断的免疫学方法提供特异性抗体。本研究利用生物信息学技术分析了Mmm国内分离株Ben-1不同传代株的全基因组序列,选取M0071蛋白作为研究对象。将原核表达的可溶性重组蛋白M0071(rM0071)作为免疫原免疫BALB/c小鼠,通过有限稀释法和间接ELISA方法筛选得到能稳定分泌抗rM0071蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株。进一步制备单抗腹水并纯化,利用Western blot方法对该单抗进行特异性鉴定,同时测定其抗体效价和抗体亚类。随后利用间接免疫荧光试验(IFA)评价该单抗对细胞感染Mmm的检测能力。结果表明成功获得1株单克隆细胞株3C4A1,将其分泌抗体命名为MAb 3C4A1。特异性结果表明,MAb 3C4A1能与Mmm的分离株和标准株发生特异性反应,而不与山羊支原体山羊肺炎亚种、丝状支原体山羊亚种、牛鼻支原体、无乳支原体、牛支原体、leachii支原体和牛A型巴氏杆菌等发生反应。抗体亚类鉴定MAb 3C4A1属于IgG1亚类、轻链为κ链。经间接ELISA测定其抗体效价为1∶256 000。IFA试验结果表明,MAb 3C4A1仅与感染EBL细胞的Mmm发生绿色荧光反应,而与牛鼻支原体、无乳支原体、牛支原体感染的细胞不发生荧光反应,特异性良好。本研究制备的MAb 3C4A1具有良好的特异性和免疫反应性,可作为CBPP病原免疫学诊断的工具,为进一步研制CBPP病原鉴别诊断试剂盒提供了基础材料。 相似文献